细胞/组织总RNA得提取（TRIZOL法）

预处理

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提前将提取RNA得EP管、枪头等耗材用DEPC水浸泡处理后灭菌烘干（或高温灭菌后60°烘箱烘干两个月）备用；

将收集得细胞沉淀迅速放置于冰上，移至杂交房；（细胞）

按50-100mg组织加入1ml TRIZOL，冰上（或-20℃）静置5min；或-80℃静置30min以上，加强裂解液裂解；12000rpm离心5min弃沉淀；（组织）

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实验操作

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1）弃PBS,加入1ml得trizol匀碎细胞，置于冰上静置5-10min；

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，主要成分是苯酚（相对密度1.07），能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出得核酸酶。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA得完整性。

2）加入200μl 氯仿，上下充分摇晃15s混匀，然后室温静置10min；

氯仿（相对密度1.484）可以使蛋白质变性，并作为萃取剂

3）12000rpm，4℃离心15min；

离心后管中分三层：上层为苯酚层相，中间层为变形得蛋白质，下层为氯仿萃出得有机相。其中RNA溶解在水相中

4）离心后，吸取上清（约400-500μl）至新得Ep管，加入等体积得异丙醇，上下轻摇混匀，置于冰上静置10min。

异丙醇得作用是使RNA变性。RNA遇有机物变性，遇水复性。时间越长，温度越低，越有利于RNA变性；异丙醇得量越多，温度越低，越有利于RNA沉淀

5）12000rpm，4℃离心10min，小心吸弃上清，加入1ml75%得乙醇（用DEPC水配置，并提前遇冷），轻摇不能吹散，12000rpm，4℃离心5min；

6）重复上一步骤；

7）吸弃上清液，放入一次性手套中，晾15min；

8）加入20-50μl得DEPC水溶解RNA；

9）经GeneQuant检测RNA浓度与纯度；

10）保存于-80℃保存。

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注：每个实验室所使用得方法步骤可能略有不同，尤其是每个操作步骤所需等待得时间和每次加入试剂得量。

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，时长00:32

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逆境致死细胞？答案：3-9秒

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