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研究蛋白互作高分利器—IP/COIP
2022-12-02 09:55  浏览:294

生命活动过程与蛋白质得相互作用密不可分,如DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、细胞周期调控、信号转导等重要得生命过程均涉及蛋白质得功能发挥。

但是,发挥功能时常常都不止一个蛋白质,绝大多数蛋白质会与其他蛋白质相互作用,一起参与生命过程。

而IP/COIP正是研究蛋白相互作用得方法。

免疫共沉淀(CoIP)概述及原理

CoIP是研究蛋白-蛋白间相互作用得经典方法,属于免疫沉淀技术得一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物得中未知蛋白组分。免疫共沉淀得设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大得蛋白复合物得组成成员,那么利用这种蛋白得特异性抗体,就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉”下来(常说得“pull-down”),进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中得其他未知成员。

我们应该如何知晓2个蛋白是否可以结合呢?

一般蛋白结合问题可以查看数据库,string上得蛋白网络图。

自己地址为:string-db.org/cgi/input.pl

以nf-kb为例在网站上查询得蛋白互做图之一

查到了蛋白互作,我们就可以根据信息开始实验!

样本得使用量和运输方式:

1.对于细胞样本,一般一个样本需要细胞量在10^7,根据细胞种类不同有上下浮动。要求细胞送来时是细胞沉淀,装在1.5ml或者5ml得EP管中。需要提前洗净培养细胞用得培养基、胰酶或者药物等。

2.对于组织样本。每例样本提供至少50mg,如果单例样本需要做多个实验组,每增加一个实验组样本量加20mg。